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常见ELISA技术要点 - 尊龙凯时品牌解析

来源:申宝江 日期:2025-07-26

在进行生物医疗实验之前,首先要准备好所有必需的实验器材,包括试管、吸头、移液器和离心机等工具。此时需根据检测标本的数量来确定所需试剂的用量。此外,所有使用的试剂应按照说明书进行平衡至室温,并仔细配制成所需的浓度。

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在标本制备过程中,必须遵循规范,每份标本的体积应至少按2-3个复孔的数量进行准备,并尽量进行分装以备份。如果在短期内无法进行实验,应注意将样本低温保存。

在ELISA试剂盒实验中,为了确定最佳的信号与背景,需要在预实验中对捕获抗体(在0.5-4μg/ml)和检测抗体(在0.25-2μg/ml)进行相互抗性的滴定。同时,确保包含在适当范围内的标准品系列稀释,依据试剂说明书中提供的常规范围进行操作。

对于标准品的配制,必须仔细阅读每种细胞因子的说明书,关注每批次的具体细节。在使用细胞因子之前,可通过瞬时离心将试剂瓶底的细胞因子尽可能多地回收。根据说明书的要求,将冻干的细胞因子复溶。待测抗原标准曲线的线性范围一般可以通过将标准品进行八次2倍系列稀释,从2000pg/ml稀释至15pg/ml。

通过标准的ELISA试剂盒操作流程、增强型试剂盒、第三类试剂或改变酶底物系统,可以在一定范围内提高实验的灵敏度。为了优化灵敏度,推荐对标准品和标本进行过夜孵育。如果使用过氧化物酶作为显色系统,应注意严禁在洗涤液和稀释液中添加叠氮钠,因为叠氮钠会抑制过氧化物酶的活性。对于在混合液体中测定的抗原(例如血清),建议在标本稀释液中添加不相干的Ig,以提高测定的准确性。

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